フェノール、パラオキシ安息香酸及びトルエンを含む混合物試料を高速液体クロマトグラ…
フェノール、パラオキシ安息香酸及びトルエンを含む混合物試料を高速液体クロマトグラフィー（HPLC）により分析した。このことに関する記述として正しいのはどれか。2つ選べ。なお、HPLC の分析条件は以下のとおりである。分析条件検出器：紫外吸光光度計（測定波長：270 nm）カラム： 内径4.6 mm、長さ15 cm のステンレス管に粒径5 μm の液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充てんする。カラム温度：35 ℃付近の一定温度移動相：pH 7.0 の0.1 mol/L リン酸塩緩衝液／メタノール（3：1 ）混液
- ⑴ 使用したHPLC は順相クロマトグラフィーである。ODS（無極性固定相）と水系移動相を用いているので、順相ではなく逆相クロマトグラフィーです。
- ⑵ 3 つの化合物のうち、最後に溶出するのはトルエンである。最も疎水性の高いトルエンがODSに強く保持され最後に溶出するので正答です。
- ⑶ カラム温度を高くするとピーク高さは大きくなり、ピーク面積は減少する。カラム温度を上げると保持時間が短くピークは鋭くなりますが、ピーク面積は基本的に変わりません。
- ⑷ パラオキシ安息香酸の保持時間を長くするには、移動相中の緩衝液のpH を低くする。pHを下げるとカルボキシ基の解離が抑えられ、疎水性が増して保持時間が長くなるので正答です。
- ⑸ トルエンの保持時間を長くするには、移動相中のメタノールの比率を高くする。メタノール比率を高くすると移動相の溶出力が強まり、トルエンの保持時間は短くなります。
解説
正解は⑵と⑷です。ODSカラムと極性の高い移動相を用いる逆相クロマトグラフィーでは、疎水性の高い化合物ほど保持が強くなります。pH 7.0ではパラオキシ安息香酸のカルボキシ基が解離して極性が高く最初に溶出し、次にフェノール、最も疎水性の高いトルエンが最後に溶出します。緩衝液のpHを下げると分子形が増えて疎水性が高まり、パラオキシ安息香酸の保持時間は長くなります。
出典：厚生労働省ホームページ（https://www.mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/bunya/0000198928.html）を加工して作成